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冬蟲夏草 |
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| 來源：未知 作者：admin 發布時間：2013-08-03 14:17 |
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冬蟲夏草，又稱為夏草冬蟲，簡稱蟲草。全世界目前已報道發現由蟲草屬真菌Cordyceps寄生于昆蟲、蜘蛛和其他生物長出子實體的蟲草種類達400多種；我國已記錄68種。在國內外一些人和學者的概念中，把凡是由蟲草屬真菌寄生并能產生子實體的菌物結合體都通稱為冬蟲夏草。然而，中國傳統的中醫藥學和我國絕大部分學者和人們及本文所指的冬蟲夏草，是特指僅分布于我國青藏高原及邊緣地區高寒草甸中的中華蟲草菌Cordyceps sienesis (Berkeley) Saccardo (1878)寄生于昆蟲綱、鱗翅目、蝙蝠蛾科、蝠蛾屬Hepialus幼蟲感病后形成的蟲、菌結合體;；而其他類群僅稱為蟲草，不是正宗的冬蟲夏草。 中國苗木網,m.cqhuayin.com 最早科學地描述和發表我國青藏高原有蝠蛾屬昆蟲分布是英國的Poujade1886年在四川省的寶興縣雪山上發現一種蝠蛾，被他定名為德氏蝠蛾Hepialus davidi；后來Alphe raky、Staudinger等學者分別于1889和1895年在西藏發現了暗色蝠蛾H.nebulosus（同種異名：泥色蝠蛾H.luteus)、異色蝠蛾H.varians兩個種類。1909年Oberthur在法國的Armorica半島上整理由中國西藏、四川帶去的藥材和植物標本中，發現一頭蝠蛾成蟲，并以該半島名稱定名為H.armoricanus，但在發表新種時說明，該種蝠蛾產地可能是中國川藏高原，因在半島一直未再發現有該種蝠蛾分布；后來一直到1959年中國科學院動物研究所科研人員在四川康定等地采到大量的蝠蛾成蟲和幼蟲，經朱弘復鑒定，與在法國Armorica半島發現的蝠蛾是同一種，從而定名為蟲草蝙蝠蛾，并確定為中國特產的冬蟲夏草菌的寄主昆蟲之一。到目前為止，在青藏高原及邊緣地區已發現中國特有的冬蟲夏草菌寄主昆蟲37種。 二、冬蟲夏草與蝠蛾昆蟲人工培育和產業化現狀 （一）有性型冬蟲夏草人工培育現狀 冬蟲夏草人工培育在近20年來全國先后有60多個科研單位和數千人進行了大量的研究、實驗和探索；云南、四川等地已在高海拔地區取得了小面積培育有性型成功的經驗，但由于周期長，高海拔地區無推廣對象、投資大、效益不如自然采集的高等多種因素，一直未能大面積推廣。在云南、四川、浙江、甘肅、青海、北京、福建、廣東、貴州、廣西等省(市、區)中低海拔地區，開展人工培育有性型冬蟲夏草研究也有多年，雖然在某一些環節上已有多家取得了十分可喜的成績或成果，如云南和四川等省已在昆明、成都和重慶的室內人工批量、重復繁殖成功蝠蛾昆蟲；浙江等地在室內零星繁殖成功蝠蛾昆蟲;但由于沒有解決蟲與菌接種和批量、重復長出子座體的難關，不能稱為培育成功。離小面積、小批量、多次重復在低海拔人工培育出有性型冬蟲夏草的目標都還十分遙遠；雖然數家已聲稱在中、低海拔批量培育成功有性型冬蟲夏草，事實上科學的可信度極低。因為： 999苗木網,m.cqhuayin.com (1)目前還無一家能長期又穩定地分離培養到正宗的冬蟲夏草真菌 (即反復在培養基上批量長出子座)。青誨、云南、四川、北京等地在培養基上都培養出過子座，但其子囊孢子稀少或無子囊孢子，而且生長都不穩定，不能說明已掌握了有性型人工在中低海拔的培育技術。 (2)冬蟲夏草菌無性型人工培養技術比較容易掌握，在室內接種到蝠蛾幼蟲上也能感染成為僵蟲期，但確罕見有完成有性型，長出子座體和子囊孢子。 (3)目前子座的形成除了海拔、氣候、土壤、氣壓等多種環境因素外，其菌之間是否多菌復合感染?如果是復合感染，又是哪一些菌在起關鍵作用?在什么時期與冬蟲夏草菌起作用?等等問題尚不清楚。 因此，要在中低海拔地區人工批量和重復培育出有性型的冬蟲夏草，還需做大量的研究和實驗工作。就是在高海拔地區進行大面積人工培育冬蟲夏草，也還需開展許多技術性的實驗工作。所以有性型冬蟲夏草人工培育要達到規模化或產業化生產，研究還十分艱巨，路程還非常遙遠。 (二)無性型冬蟲夏草人工培養現狀 由于有性型冬蟲夏草的人工培育困難太大，近10多年來，大部分開展冬蟲夏草人工培育研究的單位和研究人員都紛紛轉向無性型的研究與應用上。由于蟲草菌無性型培養技術容易掌握，而且從自然界采集冬蟲夏草分離出來的真菌，絕大部分理化性質和藥理功能與冬蟲夏草的有性成分相似，所以各地都把自我分離出的真菌確定為冬蟲夏草菌的無性階段，并紛紛建廠生產菌粉和開發應用。目前已從自然界的冬蟲夏草體中分離出自我認為是中華蟲草菌無性型共有9屬31種，其中有16種已經在北京、吉林、山西、上海、青海、浙江、福建、江西、廣東、云南、貴州等19個省 (市)40多家，進行深層大規模發酵培養和固體培養菌絲體和分生孢子體作為有性型冬蟲夏草的代用品，部分廠家已進入大的產業化生產，如至靈膠囊、金水寶膠囊、寧心寶膠囊、心肝寶、冬蟲夏草雞精、蟲草膠囊、冬蟲夏草酒、冬蟲夏草人參補酒等20多種產品年產值均達千萬元至數億元。而且，由于用菌絲體和分生袍子人工繁殖周期短、產量高，今后作為冬蟲夏草有性型的代用品，開發、應用的潛力還極大。 苗木網,m.cqhuayin.com 三、冬蟲夏草和蝠蛾昆蟲人工培育技術 (一)冬蟲夏草茵的寄主昆蟲飼養繁殖技術要進行冬蟲夏草的人工培育，首先必須大量人工飼養寄主一一蝠蛾屬昆蟲。蝠蛾一生中有98%的時間都在土壤內生活，僅有2.5一13d的成蟲期營地面生活。所以，這類昆蟲的人工飼養管理主要是在土壤中開展。 1.蝠蛾的飼養工具 (1)蝠蛾卵的飼養工具。飼養蝠蛾卵可用兩種方法，一是用直徑15一20cm的玻璃培 養皿，墊上2一3層濾紙，皿內放一塊吸水棉保持濕度，每皿可飼養200一500粒卵。此法利于觀察，但難掌握濕度。二是用l0cm xX5一8cm的廣口瓶或者25cm x 30cm的玻璃飼養 缸，內置3一5cm厚的過篩細腐殖土，種上1一2棵珠芽寥植物，把卵放養于土表至lcm深的土層中，每瓶可飼養300一1000粒卵；飼養時只要掌握住植物不枯萎，即可不加濕度。此法卵的孵化率高，但觀察和移植幼蟲對比較困難。 (2)幼蟲的飼養工具有以下4種。 a.玻璃養蟲缸：用18一25cmX30一35cm的玻璃缸，也可用標本浸泡缸，放置土壤15一25cm，種上幼蟲取食的植物，把剛孵化幼蟲移入缸內，每缸可飼養10一30頭幼蟲。 b.地下養蟲箱：箱一般高30一50cm，寬20一25cm，厚3一5cm。飼養箱骨架用鋼筋 焊成，上面鋼筋做成提手，便于提動；寬的兩面用3一5mm玻璃，便于觀察蟲體活動；底 和兩個側面裝上16孔目的銅紗網，便于水分滲入。然后裝上土壤，種植飼料植物，每箱放養20一50頭幼蟲；在較堅實的地上挖一個比飼養箱體積稍大和深的槽，把養蟲箱放入槽中，觀察時將養蟲箱提出地面，抹去外表玻璃上的土壤，即可清楚看到幼蟲活動情況。 999苗木網,999miaomu.com c.大型養蟲籠：在半自然的狀況下，選擇一塊排水好、土質疏松的場地，挖長12一l5m、寬2一3m、深4Ocm的深槽，底部和四周墊上尼龍紗網(最好用雙層，小蟲不易鉆出)，再把疏松的腐殖土鏟進填平，種上幼蟲食物，放入幼蟲飼養，每平方米可放養30一50頭；該法有利于大規模飼養，但觀察困難。 d.用各類盆具裸露飼養：把植物飼料洗凈放入盆中，放入幼蟲飼養，盆口覆蓋一層黑布或者黑紙遮光。此法利于生活史觀察，但要注意勤換飼料和清除糞便。 (3)蛹和成蟲的飼養工具。制作長50cm、寬50cm、高55一60cm的養蟲箱。底部用薄鐵板或雙層銅紗網封底；頂和四周用鐵紗或尼龍紗封蓋，前面可制成一道活動紗網門。在箱底放入10一20cm的土壤，種上植物，把蛹和成蟲放養土中，此法可進行密植飼養。 2.飼養技術要點 (1)土壤的選擇。土壤是蝠蛾昆蟲一生中最主要的活動場所。土壤條件是否適合該蟲生活是人工飼養成活率高低的關鍵之一。最適宜蝠蛾生長的是高山草甸土；次之是流石灘和草甸混合土；再次之是高山棕色、暗棕色林土，其他土壤對此蟲生長不良。 (2)食料的選擇。幼蟲最喜取食圓穗蓼、珠芽蓼、黃芪、小大黃等植物的嫩根芽。由于蝠蛾昆蟲是一類雜食性昆蟲，在無上述植物的地方，可用禾本科 (如青稞、麥、谷芽等)；十字花科、莎草科的嫩根飼養。在中、低海拔地區(適宜生活的溫度下)用土大黃、胡蘿卜、白蘿卜、白薯 (紅苕)、馬鈴薯、蘋果等飼喂也能正常生長發育，最好為土大黃、胡蘿卜和白薯三類。 苗木網,m.cqhuayin.com (3)溫、濕度的選擇。蝠蛾昆蟲是一類耐低溫而怕高溫的昆蟲。最適宜在15一19C中生活成長；此蟲最適宜空氣濕度75%一85%，土壤含水量40%一45%之間。 3.管理技術 (1)成蟲期。成蟲不取食任何食物，只要保持水分和適宜溫度即能正常成活和產卵。但蛾子棲息環境與產卵量有關。成蟲最喜選擇有杜鵑和蝠蛾幼蟲取食的蓼科等植物根旁產卵，所以在蛾子交配產卵前植上幾株相關植物最佳；另外不能有強光影響。 (2)卵期。要使卵能正常孵化，一定要掌握好適宜的溫、濕度。 (3)幼蟲期。幼蟲由于生長期長，而且蟲體壁薄而易破，飼養時一定要細心，除了必要的觀察、換土和換食料外，盡量減少翻動。幼蟲的飼養關鍵是初孵的幼齡時期，初孵幼齡蟲要給足細小鮮嫩、濕度不高的食物；土壤最好經過篩檢，以免粗硬物擦傷主體。此外，為了延長食料和土壤不霉壞，更換前用紫外燈照射殺菌l5min，土壤也可在陽光下暴曬1一2h后再用。 (4)蛹期。養蛹時，把養蛹器皿內的土壤壓實，然后用與蛹粗細的木棍人工造一土室，土室略斜，深約2一3cm，每室放一蛹，放蛹時，蛹頭向土表面，上用細土蓋住。蛹的溫濕度，可控制在大氣濕度80%一85%，土壤含水量42一45%之間，溫度18一22℃之間。 (二)冬蟲夏草菌的人工培養技術 中國苗木網,999miaomu.com 要獲得純正的冬早夏草菌種必須進行人工的分離、純化、復壯、保存等工作。 1.分離冬蟲夏草菌的技術與條件 (1)材料要求。獲得純的菌種對材料要求比較嚴格；一般來說如果是進行冬蟲夏草的組織塊分離法，最佳的分離材料是每年的10月底至11月份，青藏高原高寒草甸土壤剛開始凍結時期采的材料，這個時期冬蟲夏草菌剛感染蝠蛾幼蟲進入僵蟲期不長時間，嫩小的子座芽剛長出蟲頭部0.2一0.5cm，蟲體內其他雜菌較少，最易進行分離。如果是第二年5一6月份采的材料，僵蟲體和子座上都有許多種雜菌共生或腐生，難獲得純菌種。若用子囊孢子進行分離培養，材料最好在每年的7月中、下旬子囊孢子剛有部分成熟期采集分離培養。 (2)操作方法。有以下3步。 a.僵蟲體 (即菌核)的分離：分離前，用水刷洗干凈主體表面，再用無菌水清洗2一3次；用0.1%一0.2%的升汞溶液，對分離材料進行約3一5min的表面消毒；再用無菌水清洗。選取與胸足為界的前段部分。用解剖刀切去表皮，避開消化道，取血腔菌絲切成芝麻粒大小，壓入平板培養基中，每皿1一2粒。置于15一19℃中培養，待菌落長出0.2一0.5cm時，挑選少量菌絲反復在平板培養基上分純2一4次，確定無其他雜菌后，移入試管保存和培養。 b.子座芽分離：從僵蟲頭頂切下洗凈的子座芽，置入0.1%升汞液中消毒2一3min，用無菌水洗凈，切取中間部位組織塊壓入培養基中；培養條件同a。 中國苗木網,m.cqhuayin.com c.子囊孢子分離：用透明紙袋套住子囊孢子成熟的子座，讓子囊孢子彈跳粘貼在紙袋上，然后，把有子囊孢子的紙袋浸入25%的葡萄糖液中，洗下孢子，放入15一19℃中培養，每天鏡檢，當袍子萌發時，用微吸管吸單個孢子滴于平板中培養；培養條件同a。也可把整個成熟的冬蟲夏草帶回室內，用棉紙把僵蟲和連蟲體的子座包住，僅留出有孕部分，在無菌室中，橫放，下置一片載玻片，隨時保持主體濕度；每天鏡檢，當看到子囊孢子彈到玻片時，用微吸管吸到平皿的培養基中培養；培養條件同a。 (3)培養基的選用。 a.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基 (PDA)，此種配方是所有蟲草菌屬真菌的通用培養基，在分離培養初期可用該配方，不過菌種生長不十分旺盛，而且易老化、退化。 b.加富培養基 (1)：多性蛋白臍10g，葡萄糖50g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂0.5g，活蠶蛹30g，生長素0.5μg，瓊脂20g，加水1000mL，pH：5.0。 加富培養基 (Ⅱ)：蛋白脯40g，葡萄糖40g，去皮鮮馬鈴薯100g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂0.5g，牛肉膏10g，生長素0.5μg，蝠蛾活幼蟲 (磨碎)30g，瓊脂20g，高寒草甸土浸出液10OOmL，pH：5.0。 在加富培養基上，菌落比在PDA培養基上生長旺盛和迅速；加富Ⅱ號又優于Ⅰ號。 999中國苗木網,999miaomu.com 2.生長特性 冬蟲夏草菌的分離培養中須掌握溫度、pH值、光照、碳和氮源及無機鹽的利用狀況。 (1)不同溫度對菌絲生長的影響。冬蟲夏草菌喜偏低溫度。在0一4℃時能緩慢生長；5一8℃時生長速度加快；10一19℃是此菌較適生長發育的范圍;最佳生長溫度為15一l9℃。超過20℃菌絲猛長，菌落由白色變為灰黑或棕黃色，開始出現變異，所以不宜高溫培養。 (2)對pH值的要求。冬蟲夏草菌是一種偏酸性真菌，最適pH值為5.0一6.0，當pH值為4.5以下和6以上時，隨著增高或降低，生長緩慢至不生長。 (3)光照的影響。此菌的子囊孢子萌發和菌絲生長初期，適應于弱光和短光照，后期則適應于較強光照。在人工培養中，菌絲、分生孢子和子座等具有明顯的趨光性，向陽面生長多而密，背光面生長稀疏，全黑環境下培養的各種菌態纖弱、細長、稀疏。 (4)對碳源的利用。冬蟲夏草菌可利用多種碳源，但以葡萄糖和麥芽糖合用時生長最快，單用葡萄糖時也能良好地生長，次之是馬鈴薯等淀粉，再次之是蔗糖。 冬蟲夏草菌是一種由寄生活體寄主，再由腐生階段發育成熟的真菌，所以對氮源中的多種有機氮均能較好的利用。而以活蟲體最佳；蛋白胨與酵母膏合用生長也十分理想，次之是二者單獨使用，再次之是牛肉膏等。而對無機氮如硫酸銨、硝酸鉀等利用較差。 999苗木網,m.cqhuayin.com 對灰分養料有一定的需求，在有微量的硫酸鎂、磷酸氫二鉀的培養基中生長旺盛，次之是磷酸二氫鉀，其他鈉、鈣、鐵、銅等無機鹽也可利用。 3.培養方式 冬蟲夏草菌分離純化后，即可作為各種實驗和擴大生產應用。 (1)其擴大生產的方法常有三種：固體靜置培養法、振蕩培養法和大罐通氣發酵培養法。 a.靜置培養：主要用在固體培養，如試管斜面、三角瓶培養、米飯培養等等。在靜置培養中只要掌握好溫度和光照即可使菌正常生長。當斜面上的分生孢子成熟后，即可存入1一2℃的冰箱中保存8一14個月，也可作為種子直接用于生產。 b.振蕩培養：采用液體培養菌種或小規模繁殖培養，都可用振蕩培養。振蕩培養的培養基，把固體培養基減去瓊脂即可。設備最好選用恒溫振蕩培養機，用三角瓶置液體培養基，把試管固體菌種接入即可培養。經不斷振蕩使液體培養基中各種成分混合均勻而不致沉淀，同時促進氣體與液體接觸和交換，使氧進入液體培養基中，利于菌絲生長和分生孢子形成。 c.大罐通氣發酵培養：在大規模生產菌絲和分生孢子等菌粉時，必須用大罐通氣發酵培養法。該方法通氣是采用吸氣或真空泵減壓等方法，經過濾器除雜菌，送入罐內液體培 養基中供冬蟲夏草菌的生長發育。 999苗木網,m.cqhuayin.com (2)發酵工藝流程。自然冬蟲夏草分離純化→ 試管斜面種→ 振蕩器液體一級 種→ 二級種→ 小型種子發酵種子罐→ 生產發酵罐 → 濃縮→ 噴粉干燥→ 成品菌粉。 冬蟲夏草菌罐中發酵要求溫度在20一25℃，罐壓392.3一686.5kPa(0.4一0.7kg/cmz)，通氣量為0.5一1.OVVm*；注入發酵罐中的液體培養基為罐容的65%一75%為宜。 接種量為10%，攪拌速度為180r/min，培養時間72一96h，即可放罐濃縮和噴粉。 (3)發酵培養基多用。鮮馬鈴薯 (去皮)8%，蔗糖2%，玉米淀粉0.5%，蠶蛹粉1%，蛋白胨0.4%，硫酸銨0.2%，pH值5.5一6.0。 (4)發酵培養成品標準。分生孢子即幾全脫落母體孢子梗，孢子梗數量增加不明顯 時，在鏡下計數檢查，每毫升含分生孢子18億一25億個；殘糖低于1%；氨基氮低于0.2mg/mL，即可成為成品菌液。 4.冬蟲夏草菌回接要點 把有性型或無性型的冬蟲夏草菌孢子回接到寄主昆蟲體上，是人工培養有性型冬蟲夏草和復壯無性型菌種的關鍵措施。 (1)回接時期。冬蟲夏草回接關鍵在于選擇寄主昆蟲抗菌薄弱時期，一是蛻皮期；二是幼蟲取食活動激烈，摩擦損傷率較高時期。 (2)回接方法。又分兩種。 a.噴霧法：當飼養的蝠蛾幼蟲達4一6齡蟲，有1/3以上的幼蟲蛻皮時，把幼蟲集中，用子囊孢子或者分生孢子對入5%一10%葡萄糖液噴霧到蟲體或食物上，接種后約30min，菌液在蟲體上略干，把幼蟲放回土壤中任其自然生活。此法感病率高，但缺點是，幼蟲不易從土中取出集中，而且集中時幼蟲有互相殘殺的習性，蟲體被咬傷后，易被雜菌感染致死，冬蟲夏草菌絲未充滿體腔時，傷蟲就會腐爛，不能形成僵蟲 (菌核)。 苗木網,999miaomu.com b.自然接觸法：在大面積半自然土壤中飼養蝠蛾幼蟲，定時取小樣觀察幼蟲生長狀況，當大部分幼蟲適宜感病時，用飼料植物浸菌液種植和用細土拌菌接種，均勻撒入養蟲的地表上，然后噴水，使菌滲入土中，幼蟲取食活動時接觸感染。此法寄主感染率不太高，但一經感染致病，冬蟲夏草菌長勢好，而且未感病的蝠蛾幼蟲能正常生長，繁殖后代。 （記者 佚名） 999苗木網,999miaomu.com
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