1、理論依據(jù) (1)植物細(xì)胞全能性學(xué)說1943年White提出了“植物細(xì)胞全能性”學(xué)說。1958年,Steward和Reinert對這一學(xué)說進(jìn)行了驗證,即一切植物都是由細(xì)胞構(gòu)成的,植物的幼齡細(xì)胞含有全套遺傳基因,具有形成完整植株的能力。 (2)植物病毒在寄主體內(nèi)分布不均勻懷特(1943)和利馬塞特.科鈕特(1949)發(fā)現(xiàn),植物根尖和莖尖部分病毒含量極低或不能發(fā)現(xiàn)病毒。植物組織內(nèi)的病毒含量隨與莖尖相隔距離加大而增加。究其原因可能有四個方面:其一,一般病毒順著植物的微管系統(tǒng)移動,而分生組織中無此系統(tǒng);病毒通過胞間連絲移動極慢,難以追上莖尖分生組織的活躍生長;其二,活躍生長的莖尖分生組織代謝水平很高,致使病毒無法復(fù)制;其三,植物體內(nèi)可能存在“病毒鈍化系統(tǒng)”,而在莖尖分生組織內(nèi)活性應(yīng)最高,鈍化病毒,使莖尖分生組織不受病毒侵染;其四,莖尖分生組織的生長素含量很高,足以抑制病毒增殖。 2、脫毒方法 (1)培育脫毒母株,獲得外植體 a.正確選擇品種。用于生產(chǎn)的品種選擇很重要。因不同品種產(chǎn)量、品質(zhì)特性及對病毒侵染的反應(yīng)不同,關(guān)系到去病毒的增產(chǎn)效果和脫毒種苗的應(yīng)用年限。因此,要選擇品質(zhì)好,產(chǎn)量高,抗、耐病毒病性好的品種。 b.確保品種純度。確保獲取快繁外植體母株的品種純度是生產(chǎn)高純度、優(yōu)質(zhì)花卉種苗的基礎(chǔ)。特別是栽培歷史長的無性繁殖作物,用種量大、易造成品種混雜。因此嚴(yán)格鑒定獲取快繁外植體母株的品種純度,可避免無效勞動,提高工作效率。 苗木網(wǎng),999miaomu.com c.獲得外植體。外植體可直接取于大田,但最好取于室內(nèi)培育的,選擇生長健壯、無病蟲害的母株,既不受季節(jié)影響,又易消毒。 (2)選擇培養(yǎng)基。研究確定的基本培養(yǎng)基有許多種,其中MS適合于大多數(shù)雙子葉植物,培養(yǎng)基B5和培養(yǎng)基N6適合于許多單子葉植物,WHITE培養(yǎng)基適于根的培養(yǎng),應(yīng)先試用這些培養(yǎng)基再根據(jù)實際情況對其中的某些成分做小范圍調(diào)整。一般培養(yǎng)用MS培養(yǎng)基均能成功,但大蒜、洋蔥用B5和N6培養(yǎng)基較好。 激素濃度和相對比例的確定。用不同種類的激素進(jìn)行濃度和比例的配合試驗。在比較好組合基礎(chǔ)上進(jìn)行小范圍的調(diào)整,設(shè)計出新的配方,經(jīng)過反復(fù)摸索,選出一種適合培養(yǎng)基。 (3)剝離和接種將處理好的植物部分,如包含莖尖的莖段或芽等滅菌,置超凈工作臺40倍顯微鏡下,剝?nèi)ネ馊~和較大的葉原基,暴露出生長點分生組織,剝離帶1~2個葉原基的分生組織,接種到試管內(nèi)的芽分化培養(yǎng)基上。 (4)繼代培養(yǎng)生根和快繁將已接種外植體的試管置(23±2)℃,光照3000LX,在光周期13-16H/D的培養(yǎng)基中培養(yǎng)2-3周成苗。待苗長至1-2CM高,轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基,生長7-10D生根,轉(zhuǎn)入快繁培養(yǎng)基繼續(xù)繁殖。 3、莖尖培養(yǎng)的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié) 要提高莖尖培養(yǎng)成苗率和脫毒必須掌握下列關(guān)鍵環(huán)節(jié) 999中國苗木網(wǎng),m.cqhuayin.com (1)剝?nèi)∵m當(dāng)大小的莖尖通常培養(yǎng)莖尖越小,產(chǎn)生幼苗的無毒率越高,而成活率越低。不同病毒種類去除的難易程度不同。因此需針對不同的病毒種類,培養(yǎng)適宜大小的莖尖。例如剝離培養(yǎng)帶一個葉原基的生長點產(chǎn)生的馬鈴薯植株,可去處全部馬鈴薯卷葉病毒,去除80%Y病毒和A病毒,去除0.2%X病毒。馬鈴薯病毒去除從易到難的順序是:馬鈴薯卷葉病毒、馬鈴薯A病毒、馬鈴薯Y病毒、奧古巴病毒、馬鈴薯M病毒、馬鈴薯X病毒、馬鈴薯S病毒和紡錘塊莖類病毒。對于同一種病毒,剝離莖尖越小,脫毒率越高。大蒜帶1個葉原基的莖尖產(chǎn)生苗中84%檢測不到病毒,而帶2-3個葉原基的無毒株率僅59%。因此,一般剝離帶1-2個葉原基的莖尖即可獲得較好的脫毒效果。對于難脫除的病毒則應(yīng)配合采用其他措施。 (2)選用正確的培養(yǎng)基培養(yǎng)基由大量元素(無機鹽)、微量元素、有機成分、植物激素、糖和瓊脂調(diào)配而成。一般銨鹽及鉀鹽濃度高,有利于莖尖成活,反之則有利于生根或根生長,植物激素對莖尖的生長和發(fā)育有重要作用。植物細(xì)胞分裂素類如6-BA有利于長芽,而生長素類NAA有利于生根。不同品種對激素的反應(yīng)不同。 (3)適宜的環(huán)境條件大蒜、馬鈴薯、草莓接種后置溫度23-25℃,光照1000-3000LX,每日照光13-16H。甘薯莖尖培養(yǎng)需溫度較高,約26-32℃,光強和照光時間同馬鈴薯和大蒜。 999中國苗木網(wǎng),m.cqhuayin.com (4)莖尖接種后的生長及調(diào)節(jié)方法莖尖接種后的生長情況主要有4種。1)生長正常,生長點伸長,基本無愈傷組織形成,1-3周內(nèi)形成小芽,4-6周長成小植株。2)生長停止,接種物不擴大,漸變褐色,至枯死。此情況多因剝離操作過程中莖尖受傷。3)生長緩慢,接種物擴大緩慢,漸轉(zhuǎn)綠,成一綠點。說明培養(yǎng)條件不適應(yīng),要迅速轉(zhuǎn)入高激素濃度培養(yǎng)基,并適當(dāng)提高培養(yǎng)溫度。4)生長過速,生長點不伸長或略伸長,大量疏松愈傷組織形成,需轉(zhuǎn)入無激素培養(yǎng)基或采取降低培養(yǎng)溫度等措施。 苗木網(wǎng),m.cqhuayin.com
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