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組培基母液配制

當前位置: 中國苗木網 > 栽培技術 >
來源: 作者: 發布時間:2013-07-23 17:14

  植物組織培養(planttissueculture)是指植物的任何器官、組織或細胞,在人工預知的控制條件下,放在含有營養物質和植物生長調節物質等組成的培養基中,使其生長、分化形成完整植株的過程.植物組織培養具有取材少,培養材料經濟;人為控制培養條件,不受自然條件影響;生長周期短,繁殖率高;管理方便,利于自動化控制等特點.因而被廣泛應用于各種植物的快速繁殖之中.
  培養基母液,也叫濃縮貯備液.它是以培養基配方配制成的高倍的濃縮液,不同組分母液,它的濃縮倍數不同,一般最低為10倍,高的有50倍、100倍、200倍,甚至1000倍.母液是一個方法比較簡便、用量比較準確且被廣泛采用的配制方法.本文就如何掌握培養基母液配制的操作要領作一闡述,以供參考.
  以MS培養基為例,其母液的配制包括大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素、氨基酸、植物生長調節物質和有機附加物等種類.(見表1)
  表1   MS培養基母液的配制
  成分 規定用量/mg.L-1 擴大倍數 稱取量/ mg 母液定溶
  體積/ml 配1LMS培養基吸取量/ml
  大量元素
  KNO3
  NH4NO3
  MgSO4·7H2O
  KH2PO4
  CaCl2·2H2O
  微量元數
  MnSO4·4H2O
  ZnSO4·7H2O 999中國苗木網,999miaomu.com
  H3BO3
  KI
  Na2MoO4·2H2O
  CuSO4·5H2O
  CoCl2·6H2O
  鐵鹽
  Na2-EDTA
  FeSO4·7H2O
  維生素和氨基酸
  甘氨酸
  Vit.B1
  Vit.B6
  肌醇
  1900
  1650
  370
  170
  440
  22.3
  8.6
  6.2
  0.83
  0.25
  0.025
  0.025
  37.3
  27.8
  2.0
  0.1
  0.5
  100
  20
  20
  20
  20
  20
  1000
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  1000
  100
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  50
  50
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  38000
  33000
  7400
  3400
  8800
  22300
  8600
  6200
  830
  250
  25
  25
  3730
  2780
  100
  5
  25
  5000
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  1大量元素和微量元素母液的配制
  按規定用量,稱取所需的各種藥品,在配制時為減少工作量,可以把幾種藥品(如大量元素或微量元素)配在同一母液中(見表1).但由于各種藥品的混合,可能發生反應,生成沉淀物,以致母液失效.為避免類似現象發生,在大量元素、微量元素和維生素及氨基酸的母液配制時,可采用如下2種做法加以解決:①將要配在同一母液的大量元素、微量元素和維生素及氨基酸等化合物,按“表1”所列藥品的先后順序溶解藥品,待前一種藥品完全溶解后再加入后一種化學藥品,以此類推;②使每種成份分別完全溶解,再把它們彼此混合.
  2鐵鹽母液的配制
  鐵鹽的成份含硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)和乙二胺四乙酸二鈉(Na2-EDTA).這兩種化合物的溶解和混合較為嚴格,必須按如下方法配制,否則將會產生沉淀.該方法是:分別溶解FeSO4·7H2O和Na2-EDTA,加熱并不斷攪拌,使之完全溶解,冷卻,將2種溶液混合,調PH至5.5,用蒸溜水加至所需容積,棕色瓶保存于冰箱之中.
  3植物生長調節物質母液的配制
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  植物生長調節物質是培養基的重要組分之一,一般是植物激素類物質,如生長素類的IAA、IBA、NAA,赤霉素類的GA3,細胞分裂素類的2,4-D、KT和6-BA等.由于大多數生長調節物質難溶于水,因此配制方法也各不相同:①IAA,IBA和GA3先用少量95%酒精溶解,再加水定容,搖勻后貯于試劑瓶中、貼上標簽后,存放在冰箱中;②NAA可用熱水或少量95%酒精溶解,再加水定容至所需容積;③2,4-D可溶于少許1mol·L-1的NaOH溶液中,然后加水定容;④KT和6-BA可用少量1mol·L-1的HCl溶解,再加水定容;⑤玉米素先溶于少量95%酒精中,然后加水定容.
  植物生長調節物質濃度通常用ppm(mg·ml-1)和mol·L-1表示,在配制母液時,常以ppm較為方便,一般配制成0.5ppm的母液,這個濃度既便于計算,也可避免冷藏時形成結晶.
  4有機附加物母液的配制
  在植物組織培養時,培養基中往往要加入一些有機附加物,如椰子汁,以促進組織培養活性.由于椰子汁的活性成分是耐熱的,在配制時,要先把由果實中采集到的汁液加熱煮沸以除去其中的蛋白質,過濾,然后置塑料瓶中貯存于的-200c的低溫冰箱內. 苗木網,999miaomu.com

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