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農桿菌侵染擬南芥花序的轉化

來源：未知作者：admin 發布時間：2013-07-28 04:24

準備：
　　1．滅菌試管400毫升細長燒杯2瓶，離心瓶4-6個（250ml）。

　　2．試劑：YEP1200ml（每瓶300ml共4瓶）+Kan1;1000，Rif1:500。

　　1/2MS+2%蔗糖（滅菌115度20分鐘），Silwet在-20℃貯存。

　　步驟：

　　共轉化農桿菌：于中午12點接菌于有YEP培養液的試管中10ul：10ml接種。28℃，3000rpm搖過夜，約30小時，次日下午6點將已搖活的菌按（1：400）及750ul菌液轉至漢300毫升YEP+K50+Rif中培養28℃，300rpm約14小時，次日上午8點測OD值，用YEP+Rif作為空白對照，當菌液達到OD600為1.5~3.0之內時，可收集菌體于250ml離心瓶（滅菌）,4℃，4000g離心10min。用10%蔗糖（含0.02%silwet）稀釋至OD600約為0.8--1.0左右即，用10%蔗糖作對照。轉化時將花在溶液中浸泡50s左右，于弱光下生長。轉化前一天將需要做轉化的野生型擬南芥苗子澆水澆透。

　　注意：

　　1．選取上述配好的溶液2ml，充分打碎管底部的菌體，在將混勻的菌體溶入600ml溶液中，混勻后再加入Silwet(100%)120ul終濃度為0.02%。

　　2．先將澆透水用于轉化的苗子的夾全部剪掉，再用寬膠帶把花盆的土封好。

　　3．轉化的準備工作：2個400細長燒杯，寬膠帶，記號筆，表等。苗木網,m.cqhuayin.com

　　4．轉化過程略，視苗的長勢弱0.8Pa3`，長勢好的0.8Pa5`。

　　5．標記好，將轉化好的苗平放于盒子內，上蓋封口膜封好，避光培養24hrs2天后，將植株立起正常培養，澆水，3天1次。

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