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毛白楊離體繁殖技術

來源：未知作者：admin 發布時間：2013-07-28 06:11

毛白楊屬楊柳科楊屬，是我國特有樹種，樹干通直，高大，適應性強，生長快，是用材林和城鄉綠化的優良樹種，其優株的無性系苗木，生長速度比普通毛白楊快15%～20%，經濟價值更高。但用常規無性繁殖時，如扦插、壓條等，很難生根，加之繁殖材料有限，不僅用材多，費工費時，而且成活率低，繁殖系數不大，很難在短期內繁殖大量苗木。試管快繁對于毛白楊來說，無論在理論上和生產實踐上均具有重要的意義。目前，毛白楊的試管快繁技術已在造林育苗的生產實踐中推廣應用。我們用植物組織培養法進行毛白楊的快速繁殖，在短時間內收到了良好的效果。

    1 外植體的選擇與滅菌

    1.1 外植體脫毒

    選擇品種優良、健壯的植株進行盆栽，溫度逐漸提高到35～38℃。在這溫度下培養2個月，這期間要注意肥水的管理，以減輕高溫處理造成的死苗現象。剝取莖尖和腋芽。切取頂芽或腋芽3cm左右大小，去掉葉片，保留護嫩葉柄。用清水反復沖洗干凈。用70%的灑精浸10s，用無菌水沖洗3次。0.1%氯化汞浸5min倒出后用無菌水沖洗3～5次。取出用濾紙進行吸干。在解剖鏡下，將材料置于無菌的濾紙上，剝嫩苞葉，露出錐形體，切取0.5mm長度的莖尖，帶有2個葉原基，迅速接種到培養基上，防止莖尖脫水再要注意的一點是不要倒置。 999中國苗木網,999miaomu.com

    莖尖剝離的大小是脫毒效果的關鍵技術。莖尖剝離越小，脫除病毒的效果越好，但接種不易成活；莖尖剝離得越大，接種成活越高，但脫除病毒的效果差。結合熱處理進行莖尖培養，操作簡便，容易掌握，脫除病毒的效果好。

    1.2 休眠芽的外植體的選擇與滅菌

    毛白楊在初代培養時也可以采用休眠芽作為外植體，取當年形成的直徑在5mm左右健康無病蟲害的枝條，用解剖刀切成長度為1.5～2.0cm的節段，每個節段帶休眠芽。

    將切段先用自來水沖洗干凈，再用70%～75%酒精浸泡30s同時不斷用玻璃棒攪動，目的是能夠使外植體的表面能夠充分與酒精接觸進行消毒。倒掉酒精后，立即用無菌水沖洗3～5遍，沖洗去殘留的酒精。然后用5%的次氯酸鈉溶液或用0.1%氯化汞溶液進行浸泡7～8min，倒掉這些消毒液，再用無菌水沖洗3～5遍。在無菌操作臺上將外植體取出放在已滅好菌的濾紙上吸去殘留的水分，放在另一張已滅菌的濾紙上進行切割成帶有1個葉芽的莖段。

    1.3 葉片外植體的選擇與滅菌

    毛白楊在初代培養時也可以采用葉片做為外植體。 999中國苗木網,999miaomu.com

    將葉片先用自來水沖洗干凈，再用70%～75%酒精浸泡10s同時不斷用玻璃棒攪動，目的是能夠使外植體的表面能夠充分與酒精接觸進行消毒。倒掉酒精后，立即用無菌水沖洗3～5遍，沖洗去殘留的酒精。然后用5%的次氯酸鈉溶液或用0.1%氯化汞溶液進行浸泡7～8min，倒掉這些消毒液，再用無菌水沖洗3～5遍。在無菌操作臺上將外植體取出放在已滅好菌的濾紙上吸去殘留的水分，放在另一張已滅菌的濾紙上將葉片切成5mm×5mm。

    2 外植體的接種

    2.1 操作人員需著經滅菌物白色工作服，戴口罩。進行人接種室前，工作人員的雙手必須進行滅菌，用肥皂水充分洗滌，操作前再用70%的酒精擦洗雙手。

    2.2 操作期間經常用70%的酒精擦拭雙手和臺面。特別注意防止“雙重傳遞”的污染。

    2.3 在打開培養瓶、三角瓶或試管時，最大的污染危險是管口邊沿沾染的微生物落入管內。解決這個問題，可在打開前用火焰燒瓶口。

    2.4 工具用后及時滅菌，避免交叉污染。

    2.5 由于空氣中有灰塵，因此在操作時，仍要注意避免灰塵的落入。盡量把蓋子蓋好，當打開瓶子或試管時，應在酒精燈前與水平面成45°角，右手將已切割好的外植體用鑷子放在培養基中（但是外植體不夾的過緊或過松），之后將瓶蓋在火焰上燒一下蓋上即可。

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    3 培養基的成分

    預培養所用的培養基的成分是：MS＋0.5mg/L BA＋100mg/L水解乳蛋白，經1周的觀察將沒有被污染的外植體轉接正式誘導分化的培養基：MS＋0.5mg/LKT＋0.02mg/LNAA＋100mg/L賴氨酸＋3%蔗糖。培養室的溫度在25～27℃，日光燈連續照射16h，光強為15001x左右；經1個月培養莖段（莖尖大約在2～3個月）可以分化出芽，愈傷培養基：MS＋0.2mg/LBA＋0.02mg/LNAA＋100mg/L將葉片放在愈傷培養基上進行愈傷的誘導，產生后將其愈傷組織放在分化培養基上進行分化培養。壯苗培養基為：1/2MS＋1.5%蔗糖；兩周左右培養，即可長成帶有4～5個葉健壯的無根小植株。生根培養基為：1/2MS＋0.2mg/L IBA＋0.02mg/L NAA＋3%活性炭＋1.5%蔗糖；12h的光照與黑暗交替；光強為1500lx經1個月左右培養，即可長成帶有6～7個葉健壯完整小植株。

    4 擴大繁殖

    4.1 莖切段生芽擴大繁殖法

    將由莖尖（莖段）誘導出的幼芽從基部切下，轉接到新配制的壯苗培養基上。壯苗培養基為1/2MS＋1.5%蔗糖。經1個月左右培養，即可長成帶有4～5個葉健壯的小植株。將小苗進行切割成帶有葉的莖段再次分別插入分化培養基中如此反復循環即可獲得大批的無根苗。這時將這些無根苗分別插入生根培養基中進行生根。

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    4.2 葉切塊生芽擴大繁殖法

    每片葉從基部中脈處切取1cm×1cm并帶有約0.5cm長葉柄的葉切塊，轉接到分化培養基上進行培養，注意的是要將葉的被面貼在培養基上。可從葉柄的切口處觀察到有芽出現。之后逐漸增多成簇。每個葉切塊可得20余個叢芽。將這些芽切下，轉入生根培養基中可得到完整的小植株。

    5 誘芽的影響因素

    5.1 不同無機鹽濃度的影響

    不同無機鹽濃度的對比試驗，采用MS和1/2MS大量元素兩種濃度。對比結果，以高濃度的無機鹽對誘芽的效果為好，在低鹽濃度的培養基上芽的誘導率幾乎減少一半。

    5.2 不同激素水平的影響

    進行了3種激素水平的對比試驗，KT用量全同，只NAA的用量不同。從添加NAA0.002mg/L處理看，誘芽率皆低，只NAA的用量加大到NAA0.02mg/L時，則表現最好，當NAA0.1mg/L時則誘芽率又都有下降的趨勢。

    5.3 不同培養瓶的誘芽情況

    從100ml三角瓶和500ml廣口瓶的誘芽對比試驗看，經1個月培養，廣口瓶誘芽情況大大優于三角瓶，芽數幾乎多1倍。

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    5.4 不同途徑培養對比

    以0.5mm長的莖尖培養得到大量正常的植株，在添加一些生長素等物質。表面具有分生能力的愈傷組織，重復繼代培養仍可保持植株再生能力。大大超過傳統的方法，且比用誘導側芽的方法也高得多。

    6 移栽與管理

    6.1 嫩莖試管生根

    切取3cm左右試管苗無根嫩莖，轉插到1/2MS＋NAA（IBA）0.1～0.5mg/L培養基上，經7～10d即可達到生根率80%，12d生根率可達100%。在無植物生長物質的培養基上，生根率90%～100%。

    6.2 無根嫩莖的扦插

    將試管苗無根嫩莖切段，直接扦插到介質中生根。切段基部經生根粉處理，2周后生根率達90%。免去試管生根的這一環節，降低了成本，縮短生產時間，提高了生產效率。

    試管苗生根后，連瓶苗一起放入室，以適應光照和溫濕度。3～5d后，打開瓶口取出試管苗，按一定株行距置于細砂或粗蛭石介質中，加蓋拱棚覆膜保持溫度和濕度。5d后逐漸揭膜見光，及時通風換氣，定期噴肥和噴藥，防止有菌類的污染，提高試管苗的成活率。

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