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植物莖尖組培實驗過程

來源：未知作者：admin 發布時間：2013-07-28 07:58

植物莖尖組培實驗過程--1、外植體的選取及預處理 ⑴外植體選取選取生長健壯、已發芽、長勢較好、無病害的生姜根狀莖作為外植體。 ⑵材料預處理取帶芽的枝條或鱗莖球莖，洗衣粉適量沖洗，然后扳取或用清潔剪刀剪取帶芽部位（約1cm×1cm大小），頂芽和腋芽、大芽和小芽分開。繼續用洗衣粉清洗10分鐘，清洗時需不停晃動。再用自來水沖洗干凈，置空培養瓶備用。 2、超凈工作臺無菌操作準備檢查超凈工作臺，是否已開機滅菌，酒精燈、酒精瓶、升汞是否齊備、無菌水、培養瓶放置與位置、接種器械是否齊備與放置。 3、外植體消毒 ⑴蒸餾水沖洗外植體置于已殺菌開機的超凈工作臺上，新潔爾滅洗液消毒雙手，無菌蒸餾水清洗外植體2-3次，需隨時晃動。 ⑵酒精消毒 75%酒精倒入裝外植體的容器內，消毒外植體5-60s，時間長短視植物材料情況而定，一般幼嫩材料和室內帶菌培養材料消毒時間短，老材料或室外材料消毒時間長。動作一定迅速，需晃動，然后將酒精倒去。整個時間計算以酒精傾倒開始至酒精倒出瓶外為止， ⑶升汞消毒 1%生汞倒入裝外植體的容器內，消毒外植體5-10min，時間長短視情況而定。需晃動，在最后3min靜置，升汞注滿容器，將已灼燒的鑷子放入容器升汞內浸泡。 10%次氯酸鈉溶液倒入裝外植體的容器內，消毒外植體10-12min，時間長短視情況而定。 ⑷蒸餾水清洗用鑷子將外植體取出，放入另一無菌蒸餾水瓶中清洗，反復清洗4次。 4、材料的整理用灼燒冷卻的鑷子和剪刀對外植體進行處理，剝離外植體材料芽外部小葉片，露出尖端生長點和2-3片葉原基部分，將此部分剪下做培養材料。再用無菌蒸餾水清洗3-4次。 5、接入培養基培養基瓶放入工作臺內，將剝離的材料分別用消毒過的鑷子放入培養瓶內，蓋上瓶蓋，置培養籃內，寫上培養時間、操作人及培養品名，入培養室培養。

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